論麥芽醇對(duì)AD大鼠空間記憶障礙的影響
摘要： 目的 探討麥芽醇對(duì)AlCl3致阿爾茨海默�。ˋD）大鼠的影響。方法 采用AlCl3灌胃制作AD大鼠模型，Morris 水迷宮檢測(cè)大鼠空間記憶能力，免疫印跡檢測(cè)tau蛋白磷酸化水平。結(jié)果 麥芽醇明顯縮短大鼠尋找平臺(tái)的時(shí)間，降低tau蛋白磷酸化水平。結(jié)論 麥芽醇能有效改善因AlCl3所致的大鼠空間記憶障礙，其機(jī)制可能與抑制tau蛋白過(guò)度磷酸化有關(guān)。關(guān)鍵詞： 麥芽醇；阿爾茨海默病；空間記憶；tau蛋白
麥芽醇是從小麥、大豆等的水解液中提取的單體化合物，其在體內(nèi)外可與自由基結(jié)合，抑制膜脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)[1,2]，在阿爾茨海默�。╝lzheimer’s disease，AD）中的作用未見(jiàn)報(bào)道。AD是老年人常見(jiàn)的一種慢性進(jìn)行性神經(jīng)退行性疾病,目前針對(duì)AD的藥物治療效果不明顯。由于AD的發(fā)病原因及機(jī)制沒(méi)有完全清楚，研究開(kāi)發(fā)出真正具有預(yù)防或治療作用的藥物將有廣闊的前景和深遠(yuǎn)的`意義。本實(shí)驗(yàn)擬觀察麥芽醇對(duì)三氯化鋁（AlCl3）誘導(dǎo)的AD模型大鼠的影響。
1 材料和方法
1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和分組
成年健康雄性SD大鼠60只，體質(zhì)量200～250g，華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。隨機(jī)分為對(duì)照組（Con）、AD模型組(AD)、麥芽醇組(maltol，MT)，每組10只。
1.2 造模與用藥
AD模型組、麥芽醇組每日上午給予AlCl3（200mg/kg）灌胃，1次/d，連續(xù)9周；麥芽醇組自AlCl3灌胃第7d開(kāi)始，除上午給予AlCl3外，每日下午給予麥芽醇10mg/kg灌胃，1次/d，連續(xù)8周，以上參照文獻(xiàn)[3]。
1.3 Morris 水迷宮檢測(cè)
造模結(jié)束后進(jìn)行Morris 水迷宮檢測(cè)。測(cè)試用圓形水池直徑120cm，高60cm；圓柱形有機(jī)玻璃平臺(tái)直徑10cm，高40cm，平臺(tái)的頂端平面低于水池液面2cm。室溫及水溫均保持在（26±2）℃，水以奶粉攪渾，整個(gè)背景均為乳白色，以避免老鼠用視覺(jué)搜尋平臺(tái)。大鼠在訓(xùn)練前放入水池自由游泳120s，使其熟悉環(huán)境。訓(xùn)練時(shí)將大鼠從任一象限1/2弧度處頭面向池壁輕放于水中，其游泳圖像經(jīng)水面上方1.5m處的攝像機(jī)拍攝并連接于路徑追蹤系統(tǒng)采集，通過(guò)微機(jī)分析，可提供潛伏期（即老鼠從入水點(diǎn)找到平臺(tái)所用時(shí)間）、路徑、搜索策略等指標(biāo)，本實(shí)驗(yàn)選用潛伏期和游泳路徑衡量大鼠學(xué)習(xí)和記憶成績(jī)。每只大鼠每天在4個(gè)象限各訓(xùn)練1次，每次游泳時(shí)間限為120s，若在120s內(nèi)未找到平臺(tái)者系統(tǒng)自動(dòng)停止記錄，潛伏期記為120s，由測(cè)試者引導(dǎo)其上臺(tái)，休息30s后進(jìn)行下一次訓(xùn)練。采用的實(shí)驗(yàn)策略為每組大鼠于第8周末開(kāi)始連續(xù)訓(xùn)練7d，以大鼠第7d訓(xùn)練的成績(jī)作為測(cè)試成績(jī)，訓(xùn)練時(shí)間每天固定在2∶00pm 到8∶00pm。將各組所得的成績(jī)作比較，可反映大鼠空間記憶保留情況。
1.4 免疫印跡檢測(cè)
水迷宮測(cè)試后立即將大鼠頸椎脫臼斷頭處死，隨后行海馬樣品制備、蛋白濃度測(cè)定、SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳以及轉(zhuǎn)移電泳，最后進(jìn)行化學(xué)發(fā)光法顯影, 其過(guò)程大致如下: 0.1%TTBS 洗PVDF膜，5%脫脂奶粉封閉2h，1∶200兔多克隆R134d、PS396一抗(Santa Cruz Biotech, Inc.)4 ℃孵育過(guò)夜; 0.1 % TTBS 洗膜, 1∶200 稀釋的HRP 抗兔二抗室溫孵育1 h,0.1%TTBS 洗, 15min ×4 次,最后在暗室中進(jìn)行化學(xué)發(fā)光法顯影，高敏感膠片攝片、洗片。
1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
所有描述性數(shù)據(jù)用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差 (±s)表示，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS10.0中方差分析，P
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