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檢驗(yàn)技師考點(diǎn):酶活性測(cè)定
20世紀(jì)50年代以前大都使用固定時(shí)間法。這種方法是以酶催化反應(yīng)的平均速度來(lái)計(jì)算酶的活性,現(xiàn)多已不用。50年代中期開(kāi)始采用連續(xù)監(jiān)測(cè)法。這種方法用自動(dòng)生化分析儀上完成,可以測(cè)酶反應(yīng)的初速度,其結(jié)果遠(yuǎn)比固定時(shí)間法準(zhǔn)確,在高濃度標(biāo)本尤為明顯,但本法也受到反應(yīng)時(shí)間,反應(yīng)溫度,試劑等的影響,應(yīng)加以注意。
1)定時(shí)法:
通過(guò)測(cè)定酶反應(yīng)開(kāi)始后某一時(shí)間段內(nèi)(t1到t2)產(chǎn)物或底物濃度的總變化量來(lái)求取酶反應(yīng)初速度的方法,稱為兩點(diǎn)法,其中t1往往取反應(yīng)開(kāi)始的時(shí)間。在酶反應(yīng)一定時(shí)間后,往往通過(guò)加入強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、蛋白沉淀劑等,使反應(yīng)完全停止,所以也叫中止反應(yīng)法。
2)連續(xù)監(jiān)測(cè)法:
又稱為動(dòng)力學(xué)法或速率法、連續(xù)反應(yīng)法。在酶反應(yīng)過(guò)程中,用儀器監(jiān)測(cè)某一反應(yīng)產(chǎn)物或底物濃度隨時(shí)間的變化所發(fā)生的改變,通過(guò)計(jì)算求出酶反應(yīng)初速度。
3)平衡法:
通過(guò)測(cè)定酶反應(yīng)開(kāi)始至反應(yīng)達(dá)到平衡時(shí)產(chǎn)物或底物濃度總變化量來(lái)求出酶活力的方法,又叫終點(diǎn)法。
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