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高效液相色譜法測定鹽酸溴己新片的含量
【摘要】 目的 建立高效液相色譜法測定鹽酸溴己新片的含量。方法 色譜柱：Alltima C18柱(4.6 mm×150 mm，5 μm);流動相: 乙腈?0.05 mol·L-1磷酸鹽緩沖液(含0.2%三乙胺，pH=3.0)(體積比30∶70)，流速1.0 mL·min-1，檢測波長為249 nm 。 結果 鹽酸溴己新在66.0～96.4 μg·mL-1濃度范圍內線性良好(r=0.999 9，n=5),平均回收率為98.85%(RSD=0.60%,n=6)。結論 本法快速、簡便、準確，重復性好。
【關鍵詞】 高效液相色譜法;鹽酸溴己新;含量測定
Abstract: Objective To establish a method for content determination of bromhexine hydrochloride in tablets.Methods Bromhexine hydrochloride in the tablets was analyzed on an Alltima C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)column with mobile phase composed of acetonitrile?0.05 mol·L-1 phosphate buffer (30∶70, final pH3.0 adjusted with 0.2% triethylamine). The flow rate was 1.0 mL·min-1 with UV detection wavelength at 249 nm.Results Calibration graph was linear (r=0.9999, n=6) in concentration range 66.0?96.4 μg·mL-1 . The average recovery of bromhexine hydrochloride was 98.85% and RSD 0.60% (n=6).Conclusions The method is simple, rapid and reproducible.
Key words:HPLC;bromhexine hydrochloride
鹽酸溴己新是一種臨床上常用的祛痰藥，療效確切。目前鹽酸溴己新的含量測定方法有紫外分光光度法[1]、HPLC法[2]和毛細管電泳法[3]，中華人民共和國藥典2005年版收載的鹽酸溴己新片的含量測定方法為紫外分光光度法，但該法測含量專屬性不夠強，易受輔料干擾[4]。為系統(tǒng)評價其藥品質量，確保臨床療效，本文建立了高效液相色譜法測定鹽酸溴己新含量的條件，并與紫外-可見分光光度法的測定結果做比較，結果表明高效液相色譜法更為簡便、準確、專屬性強。
1、儀器與試藥
1.1儀器
島津LC?10AT型高效液相色譜儀，島津SPD?10A紫外檢測器;UV?2450型紫外?可見分光光度計
1.2試藥
鹽酸溴己新對照品(100427?200402，供含量測定用)購自中國藥品生物制品檢定所;鹽酸溴己新片(廣州南沙琪寶制藥有限公司，批號20060805，20060807，20060810);乙腈為色譜純，其余試劑為分析純。
2、方法與結果
2.1色譜條件
色譜柱：Alltima C18柱(4.6 mm×150 mm，5 μm);流動相：乙腈?0.05 mol·L-1磷酸鹽緩沖液(含0.2%三乙胺，pH=3.0)(體積比30∶70);檢測波長249 nm，流速1.0 mL·min-1，進樣量20 μL。色譜圖見圖1。
2.2溶液的制備
2.2.1對照品溶液的制備
精密稱取10.6 mg鹽酸溴己新對照品，置25 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取2 mL至10 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，用0.45 μm的微孔薄膜濾過，即得質量濃度為84.80 μg/mL的對照品溶液。
2.2.2供試品溶液的制備
精密取樣品0.15 g，置于50 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取2 mL至10 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，0.45 μm的微孔薄膜濾過，即得。
2.2.3空白溶液的制備
將不含被分析成分的鹽酸溴己新輔料混合均勻后，精密稱取93.9 mg到50 mL容量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。
圖1HPLC圖譜 略
2.3線性關系考察
分別精密吸取對照品溶液4、8、10、16、20 μL,進樣測定峰面積。以色譜峰峰面積(A)為縱坐標,對照品進樣量(m)為橫坐標,繪制標準曲線并進行線性回歸,得回歸方程：A=27 251m-120 995(r=0.999 9，n=5)，結果表明,鹽酸溴己新的進樣量在66.0～96.4 μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系,線性范圍是33.92～169.6 μg·mL-1。
2.4精密度試驗
取同一對照品溶液，按上述色譜條件，連續(xù)進樣6次，每次20 μL，測定峰面積，結果峰面積的RSD為0.59%，表明精密度良好。
2.5穩(wěn)定性試驗
取同一供試品溶液，分別于制備后0、2、4、8、12、16、24 h進樣，按上述色譜條件測定，峰面積的RSD為0.71%。說明鹽酸溴己新樣品溶液在24 h內基本穩(wěn)定。
2.6重復性試驗
分別取同一批供試品,按“2.2.2”項下方法重復制備樣品6份,并按以上色譜條件進行測定，計算得鹽酸溴己新含量分別為99.92%、100.93%、100.12%、99.58%、99.50%、101.20%，RSD為0.70%，結果表明供試品制備方法重復性良好。
2.7回收率試驗
取已知含量的樣品約0.05 g，共6份，精密稱定，分別精密加入鹽酸溴己新對照品18.00、18.40、20.10、20.90、21.90、22.90 mg，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進行測定，計算回收率，結果見表1。
表1鹽酸溴己新回收率試驗結果(略)
2.8樣品測定
分別精密稱取3批樣品, 按“2.2.2”項下方法制備,按上述色譜條件進行測定，結果見表2。
表2鹽酸溴己新片的含量測定結果(略)
3、討 論
3.1本實驗通過對鹽酸溴己新對照品溶液進行紫外掃描(190～400 nm)，得到紫外吸收圖，結果發(fā)現鹽酸溴己新在249 nm處有最大吸收峰，故選擇249 nm為檢測波長。
3.2實驗中曾考察過甲醇?冰醋酸水溶液、乙腈?冰醋酸水溶液、甲醇?磷酸鹽緩沖液、乙腈?磷酸鹽緩沖液等不同的流動相系統(tǒng)，結果發(fā)現乙腈?磷酸鹽緩沖液(0.05 mol·L-1磷酸二氫鉀溶液加0.2%三乙胺溶液，用磷酸調節(jié)pH為3.0)(體積比30∶70)為流動相時，鹽酸溴己新的峰形好，賦形劑也不干擾其測定。本法測定鹽酸溴己新的含量，回收率高，呈良好線性，重復性良好，符合定量分析要求。
3.3同時對相同3批樣品按中國藥典[1]中的紫外分光光度法進行測定,結果平均標示量分別為101.3%、101.8%、98.6%,RSD分別為1.36%、1.82%、1.90%(n=6);與HPLC法的測定結果比較,2種方法之間差異沒有顯著性。
【參考文獻】
[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：二部[S].北京:化學工業(yè)出版社，2005:585-586.
[2] 殷國真,韓加怡.高效液相色譜法測定定喘止咳膠囊中三組分的含量[J].現代應用藥學,1995,12(2):56-57.
[3] 鄒定,吳學軍,南國柱.毛細管區(qū)帶電泳測定復方氯丙那林片中3種藥物含量[J].中國藥學雜志,1998,33(6):360-362.
[4] 葉雋,陳斌.HPLC法測定鹽酸溴己新片的含量及溶出度[J].藥學服務與研究，2006，6(2)：148-149.
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